SOAPfuse中怎么实现融合基因操作
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1. reference database
和其他软件类似,SOAPfuse也需要建立物种对应的数据库,在软件安装的source目录下,提供了建立数据库的脚本,用法如下
perl SOAPfuse-S00-Generate_SOAPfuse_database.pl \ -wg hg19.fa \ -gtf Homo_sapiens.GRCh47.85.chr.gtf \ -cbd cytoBand.txt.gz \ -gf HGNC_Gene_Family.tsv \ -sd /software/SOAPfuse-v1.27 \ -dd /database/hg19 \ -rft chr.gtp
wg参数代表基因组的fasta文件,gtf参数代表gtf文件,cbd代表从UCSC下载的cytoband文件,gf代表从HGNC下载的基因信息,sd代表软件的安装目录,rft代表gtf文件中的染色体名称和fasta文件中的染色体名称的对应关系。
对于需要从数据库下载的文件,在该脚本的帮助信息中给出了非常详尽的提示, 这里就不赘述,对于rft文件,内容为\t分隔的两列,示例如下
1 chr1 2 chr2
第一列代表gtf文件中的染色体编号,第二列代表fasta文件中的染色体编号。
2. sample list
SOAPfuse通过sample.list文件读取样本信息,该文件内容如下
\t分隔的4列,第一列代表样本名称,第二列代表为lane ID,第三列代表run ID, 第四列代表读长。之所以每个样本需要提供lane ID和run ID, 是出于测序时一个样本会有多条lane的考虑,对于多条lane的数据,因为属于同一个样本,所以需要合并起来。
在实际分析时,我们只有每个样本对应的R1和R2端数据,所以lane ID和run ID自己随便定义就好了,下面是一个实际的例子,共6例样本
A1 Lib-A1 Run-A1 150 A2 Lib-A2 Run-A2 150 A3 Lib-A3 Run-A3 150 B1 Lib-B1 Run-B1 150 B2 Lib-B2 Run-B2 150 B3 Lib-B3 Run-B3 150
3. sample sequence directory
sample.list中只提供了样本的名称等信息,在分析时肯定需要知道每个样本对应的测序数据的路径。在SOAPfuse中,通过一个固定的目录结构来实现,示意如下
所有的样本的测序数据位于一个总的目录下,称之为WHOLE_SEQ-DATA_DIR,在该目录下,每个样本是一个子目录,名称必须和sample.list文件中的样本名一致;在每个样本的目录下,是每个lane ID对应的目录;在lane ID的目录下,就是样本的原始数据,以run ID作为前缀。
对于样本的测序数据,要求是gzip压缩的格式,支持fasta和fastq两种格式;文件名称要求以对应的run ID开头,双端数据用_1, _2区分,后缀的话只需要所有样本统一即可,具体的后缀可以在配置文件中设置。
4. config
在软件安装的config目录下,有一个名为config.txt的模板配置文件,我们需要对其进行修改,主要修改以下几个内容
DB_db_dir = /software/SOAPfuse-v1.27/db/ PG_pg_dir = /software/SOAPfuse-v1.27/source/bin PS_ps_dir = /software/SOAPfuse-v1.27/source PA_all_fq_postfix = fq.gz
DB_db_dir代表第一步建好的数据库的目录,后面两个选项只需要替换成soapfuse实际的安装目录就行了,PA_all_fq_postfix代表测序原始数据文件名的后缀,默认是fq.gz。
以上四点内容都准备好之后,就可以进行分析了,代码如下
perl SOAPfuse-RUN.pl \ -c config.txt \ -fd raw_data \ -l sample.list \ -o out_dir
-c指定配置文件,-fd指定测序数据存放的目录,-l指定样本的sample.list文件,-o指定结果的输出目录。
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